EarlyTox細胞生存率アッセイキット
EarlyTox細胞生存率アッセイキットとは
EarlyTox™細胞生存率アッセイキットは、哺乳類細胞を用いて細胞生存率、細胞増殖、各種アポトーシス現象を評価するための蛍光ベース試薬ファミリーです。マイクロプレートリーダーでの使用に最適化されたこれらのアッセイキットは、洗浄不要の均一性アッセイプロトコルを採用しており、試験化合物の完全濃度反応プロファイルの特性評価が可能です。
EarlyTox細胞生存率アッセイキット
細胞生存率アッセイは、細胞死のメカニズムの解明から、疾患におけるアポトーシスを標的とした新しい治療法の開発まで、幅広い研究分野において重要である。細胞生存能の最も一般的な検出技術の一つは、蛍光マイクロプレートリーダーです。EarlyTox細胞生存率アッセイキットは、細胞生存率をモニタリングするための完全なソリューションを提供する高感度かつ高精度のマイクロプレート検出用に最適化されています。
・マイクロプレートリーダーアッセイの最適なデータ品質
・簡素化された均一性実験プロトコル
・SoftMax Proソフトウェアの設定済みプロトコル
EarlyTox™ 生死判定アッセイキット
このキットは、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて、細胞膜の完全性に基づ いて哺乳類細胞の生細胞集団と死細胞集団の両方を検出することができる。カルセイン AM は広く使用されている生細胞マーカーです。非蛍光性のカルセインAMは無傷の細胞膜を透過し、細胞内のエステラーゼによって蛍光性のカルセインに変換される。したがって、生細胞の数は、励起波長495 nm、発光波長530 nmの細胞質内の緑色蛍光強度によって示される。EthD-IIIは実質的に無蛍光であり、無傷の細胞膜に対して不透過性である。細胞死を伴う細胞膜の完全性が損なわれた場合、EthD-IIIは細胞内に侵入し、核酸に結合する。その結果、死細胞では、励起波長530 nm、発光波長645 nmの明るい赤色蛍光が生じる。
EarlyTox™ ライブセルアッセイキット
このキットは、細胞膜の完全性と細胞内エステラーゼ活性に基づき、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて哺乳類細胞の生細胞集団の検出を可能にします。カルセイン AM は広く使用されている生細胞マーカーです。非蛍光性のカルセインAMは無傷の細胞膜を透過し、細胞内エステラーゼによって蛍光性のカルセインに変換される。したがって、生細胞の数は、励起波長495 nm、発光波長530 nmの細胞質内の緑色蛍光強度によって示される。カルセインAMは細胞毒性が低いため、長期間の細胞追跡や細胞増殖アッセイも可能である。
EarlyTox™カスパーゼ-3/7 R110アッセイキット
このキットは、カスパーゼ-3/7活性とそのコンセンサス標的配列であるAsp-Glu-Val-Asp (DEVD)に基づいたアポトーシスの解析を可能にします。カスパーゼ-3とカスパーゼ-7はアポトーシスの実行段階で活性化されるプロテアーゼです。本キットは、マイクロプレートリーダー用に特別に設計されたシングルステップの均一性アッセイを提供する。蛍光基材(Ac-DEVD)2-R110は、2つのDEVDコンセンサス標的配列を封じ込め、細胞溶解液中で酵素により完全に加水分解される。両DEVDペプチドの加水分解により緑色蛍光色素R110が放出され、励起490 nm、発光520 nmの大幅な蛍光の増加をもたらす。このアッセイキットには、陰性コントロールとして使用するための競合的カスパーゼ-3/7阻害剤Ac-DEVD-CHOが含まれている。また、カスパーゼ-3活性の定量に使用できる標準曲線を作成するためのR110もキットに含まれている。
EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488アッセイキットおよびEarlyTox™ Caspase-3/7-D NucView 488アッセイキット
このキットは、蛍光マイクロプレートリーダーまたは蛍光イメージングシステムを用いたカスパーゼ-3/7活性の測定に基づき、インタクトな細胞集団におけるアポトーシスの検出を可能にします。カスパーゼ-3とカスパーゼ-7はアポトーシスの実行段階で活性化されるプロテアーゼです。NucView 488 Caspase-3 基材（EarlyTox Caspase-3/7-D NucView 488 Assay Kit および EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit 用にそれぞれ DMSO またはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中に調製）は、カスパーゼ活性を阻害することなくインタクト細胞内のカスパーゼ-3/7 活性を検出するために使用される。基質は、カスパーゼ-3/7 DEVD認識配列に結合した蛍光性DNA色素からなる。最初は無蛍光であるが、基質は細胞膜を透過して細胞質に入る。アポトーシス細胞では、カスパーゼ-3/7が基材を切断し、細胞核に遊走する親和性の高いDNA色素を放出し、500 nmで励起、530 nmで発光する明るい緑色の蛍光でDNAを染色する。NucView 488 染色はホルムアルデヒド固定が可能で、その後の免疫染色に適合する。このアッセイキットには、必要に応じてバックグラウンド蛍光を減少させるためのマスキング試薬（オプション）が含まれている。DMSOに感受性のあるセルにはPBS製剤を推奨する。
EarlyTox細胞生存率アッセイキットのデータ
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SpectraMaxマイクロプレートリーダーの代表的なデータ
HeLa細胞を用いて収集したデータ。(A）生死：緑（生）／赤（死）蛍光比で測定した細胞生存率、（B）カスパーゼ-3/7 R110：カスパーゼ3/7活性で測定した細胞アポトーシス、（C）グルタチオン：グルタチオン含量で測定した細胞アポトーシス、D&E： カスパーゼ-3/7 NucView 488。EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488アッセイキットは、インタクトなアポトーシス細胞の核がカスパーゼ活性ごとに標識されるため、蛍光イメージイメージングにも応用できる；（D）プレートリーダーでのカスパーゼ3/7活性の評価；（E）蛍光イメージを用いたカスパーゼ3/7の評価。
EarlyTox細胞生存率アッセイキットを支援する製品・サービス
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SpectraMax i3x マルチモードマイクロプレートリーダー
研究ニーズに合わせて進化できるマイクロプレートリーダー
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SpectraMax iD3/iD5 マルチモードマイクロプレートリーダー
大型タッチスクリーンを備えた高感度マイクロプレートリーダー
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Gemini XPSおよびEM マイクロプレートリーダー
フィルター不要の蛍光検出
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SpectraMax Paradigm マルチモードマイクロプレートリーダー
高速で設定可能なマイクロプレートリーダー1台でハイスループットスクリーニングが可能
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FlexStation 3 マルチモードマイクロプレートリーダー
イオンチャネル・GPCR活性の測定に威力を発揮する
自動マルチチャンネルピペッター搭載マルチマイクロプレートリーダー -
SpectraMax Mシリーズ マルチモードマイクロプレートリーダー
妥協ない性能と低価格を両立したマルチモードマイクロプレートリーダー
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SpectraMax Mini マルチモードマイクロプレートリーダー
妥協ない性能と低価格を両立したマルチモードマイクロプレートリーダー