酵素 - IMAPアッセイ

酵素 - IMAPアッセイとは

IMAP®テクノロジーは、基質ペプチドの配列に関係なく、様々なキナーゼ、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼに適用可能なホモジニアスアッセイを提供します。このアッセイは、混合して読み取るだけの簡単な手順で、酵素活性を正確に測定することができます。

・IMAPは、キナーゼ、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼをスクリーニングするための完全なアッセイシステムを提供する。
・IMAPアッセイは抗体ベースではないので、汎用性があり、あらゆるキナーゼ、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼに使用できる。
・ロバスト性の蛍光シグナルにより、信頼性の高い結果が得られ、Zファクターも良好である。
・IMAPアッセイはホモジニアスであり、コスト削減のための小型化が可能である。
・IMAPアッセイは、FPおよびTR-FRET検出モードの両方が利用可能で、ユーザーのスクリーニングニーズに対応する。

酵素 - IMAPアッセイ

ホスホ基と3価の金属含有ナノ粒子（ビーズ）との特異的で親和性の高い相互作用に基づくIMAPは、キナーゼ、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼ活性を評価するための汎用的な非抗体ベースのプラットフォームである。蛍光標識した基質を用いて酵素反応を行う。IMAP Binding Systemを添加すると酵素反応が停止し、ビーズとリン酸化基質との結合が始まる。酵素活性に相関する基質のビーズへの結合は、読み出しとしてFPまたはTR-FRETを用いて検出することができる。

IMAPプログレッシブバインディングシステム

IMAP Progressive Binding Systemにより、研究者は使用する基質ごとにFPおよびTR-FRETアッセイ条件を最適化できる。このシステムはProgressive Binding Buffer AとProgressive Binding Buffer B、およびProgressive Binding Reagentで構成されている。2つのバッファーと試薬は、選択する基質の酸性特性、望ましいATP濃度、バックグラウンドパラメーターに応じて、異なる割合で組み合わせることができる。

IMAP基質

Molecular Devices社は、検証済みの基質およびキャリブレーターを幅広く提供しています。基質は、本来バリデートされた酵素と共に使用することも、他の酵素の基質として使用することもできます。

・最適化された結合条件を持つ検証済みのIMAP基質は、IMAPプラットフォームの使用時に最高のパフォーマンスを保証します。
・基質には2種類のサイズがあり、IMAP FPとIMAP TR-FRETの両方で使用可能
・数十種類の基質が100種類以上の酵素で検証されています。多くの基質が赤または緑の蛍光ラベルで利用可能で、マルチプレックスを可能にし、化合物の自家蛍光から生じる問題に対処する方法を提供する。

IMAPアッセイのデータ

サンプルIMAP FPデータ： ROCKII希釈曲線
Progressive Binding Systemを用いたBSAおよびTween IMAP Reaction Buffer中のROCKIIの酵素希釈曲線。反応条件 ROCKIIキナーゼ（Upstate: 14-451）、100 nM FAM-S6由来基質（5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH、R7184）、100 µM ATP。IMAP結合溶液の条件： 100% Binding Buffer A、Progressive Binding Reagent 1:400。
FP対TR-FRET検出
スタウロスポリンによるAkt阻害： IMAP TR-FRET検出（上）とIMAP FP検出（下）の比較。反応条件： Aktキナーゼ（0.1u/ml、Upstate：14-276）、300 nM、1µM、3µM FAM-Crosstide（5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH、R7110）、10 µM ATP、スタウロスポリンは指示通り。IMAP結合溶液： 40% Binding Buffer A、60% Binding Buffer B、Progressive Binding Reagent 1:400。