発光アッセイ 化学反応(化学発光)または酵素反応(生物発光)の結果、物質が発光すること
発光とは何か?
発光とは、化学反応(化学発光)または酵素反応(生物発光)の結果、物質が発光することです。
発光検出は、励起用の光源や特異性光学系を必要としないため、蛍光検出よりも光学的に単純です。
発光はカイネティックプロファイルによって「フラッシュ」反応と「グロー」反応があります。フラッシュ発光は、短時間、通常は数秒間、非常に明るいシグナルを発します。グロー発光は、より安定したシグナルを発するが、通常はそれほど強くなく、数分から数時間持続します。フラッシュルミネッセンスでは一般に、シグナルを見逃さないよう、測定直前に反応に基質を供給できるインジェクターを備えた検出システムが必要です。白色マイクロプレートは光を反射し、シグナルを最大にするため、通常ルミネッセンスに推奨されます。(図1参照)
発光の利点
ルミネッセンスは、吸光度や蛍光に比べて、多くのアプリケーションで非常によく使われる検出プラットフォームです。一般に、バックグラウンド干渉(化合物、培地、セルからの自家蛍光)が少ないため、ダイナミックレンジが広く、感度が高く。さらに、発光アッセイはホモジニアス(洗浄なし)プロトコルを使用することが多く、ハイスループット・アプリケーションの自動化がより簡単になります。
発光の概要
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ATPベース細胞
生存能アッセイ細胞生存能と細胞毒性を測定する発光アッセイは、培養中の生存細胞数を測定し、実験処理の細胞毒性効果を定量化する高感度かつ迅速な方法を提供します。これらのアッセイは、SpectraMax® マイクロプレートリーダーを使用してハイスループットで行うことができます。
SpectraMax i3x マルチモードマイクロプレートリーダーでの発光細胞生存能および細胞毒性アッセイ >
ホモジニアスで安定した発光アッセイを用いて、がん細胞の生存率を測定する > -
化学発光ELISA法
血管内皮増殖因子(VEGFs)は分泌型ポリペプチドの一群で、哺乳類の血管発生や血管の異常増殖を伴う疾患過程に関与しています。
SpectraMax Lマイクロプレートルミノメーターを用いた 化学発光VEGF ELISA法 > -
カスタマーブレークスルー
ビオネア、3D疾患モデルのハイスループットなイメージングにImageXpress Micro Confocalを採用
免疫腫瘍学と神経変性疾患モデリングのための早期創薬に革命を起こす: 3D疾患モデルのハイコンテントイメージャー
3D疾患モデルのハイスループットなイメージングにImageXpress Micro Confocalを使用 > -
細胞毒性アッセイ
安全性と有効性の試験に適した予測可能なin vitroアッセイの開発は、医薬品開発プロセスを改善し、薬剤の減少を抑えるために高い関心を集めています。医薬品開発の初期段階において、幹細胞を化合物スクリーニングのツールとして用いることに大きな関心が寄せられています。
この学術ポスターでは、幹細胞由来の細胞モデルを用いて、様々な化合物の毒性評価をハイスループットで行うために、当社のマルチモードプレートリーダーで得られた結果を紹介します:
SpectraMax® Paradigmプレートリーダーを用いた毒性評価のためのハイスループット細胞ベースアッセイ > -
ルミノメーターは
どのように機能するのか?発光反応をマイクロプレートでセットアップする場合、ルミノメーター(または発光マイクロプレートリーダー)を用いて、発生する光の量を測定します。マイクロプレートは光密閉の読み取りチャンバーに置かれ、各ウェルからの光はPMTによって順番に検出される。発光測定値はRLUとして表されます。
ほとんどの発光アプリケーションでは、特定の波長を選択することなく、サンプルによって生成された全光を測定します。しかし、BRETのような他のアプリケーションでは、ルミネッセンスプレートリーダーは、結合や他の生体分子イベントを測定するために、特異性の波長を選択できるフィルターやモノクロメーターを装備することができます。
SpectraMax L マイクロプレートリーダー > -
発光検出の仕組みは?
外部光源による励起で分子が発光する蛍光とは異なり、発光は酵素とその基質などの化学反応や生物反応によって生じます。その結果生じる光は光電子増倍管(PMT)によって検出され、光子は電子に変換され、その結果生じる電流は光量に比例します。シグナルの測定は相対光単位(RLU)で表されます。
発光モードマイクロプレートリーダー > -
マイコプラズマ
モニタリング原核生物の中で最も小さく単純なマイコプラズマは、細胞培養によく混入します。マイコプラズマ汚染の症状には、増殖速度の低下や遺伝子発現を含む細胞応答の変化が含まれます。
Lonza社のMycoAlertアッセイとMycoAlert PLUSアッセイが、発光マイクロプレートリーダーを用いて、細胞培養中の生存マイコプラズマを迅速かつ簡便に検出する方法をご紹介します。
Molecular DevicesマイクロプレートリーダーでのMycoAlertマイコプラズマ検出アッセイ > -
NanoBRET/BRET
BRET(生体発光共鳴エネルギー転移)は、タンパク質間またはタンパク質とリガンドの相互作用を測定するための技術であり、生体発光ドナーと蛍光アクセプターの相互作用を伴います。
NanoBRETシグナルを検出し、得られたデータを解析するには、高感度のインストゥルメンテーションと高度なソフトウェアが必要です。
NanoBRET技術によるp53-MDM2タンパク質間相互作用の測定 >
SpectraMax i3x マルチモードマイクロプレートリーダーに搭載されたNanoBRETテクノロジー > -
活性酸素 (ROS)
活性酸素(ROS)は、酸素を封じ込めた化学的に反応性の分子です。真核生物では、これらの分子は主に好気呼吸中に生成され、DNA損傷や脂質過酸化などの問題を引き起こし、その結果、細胞に損傷を与えます。
SpectraMaxマイクロプレートリーダーによる活性酸素種の測定 > -
シングル/デュアル
ルシフェラーゼレポーター
遺伝子アッセイレポーター遺伝子アッセイは、細胞経路の活性化に関連した遺伝子発現を研究するための重要なツールです。セルには、レポーター遺伝子と目的の配列(通常はプロモーターまたは他の転写制御エレメント)を封じ込めたプラスミドをトランスフェクトします。プロモーターが活性化されると、レポーター遺伝子が発現し、そのレベルを測定することができます。
SpectraMax iD5マイクロプレートリーダー*を用いた高感度デュアルレポーターアッセイでNF-kB活性化をモニタリング >
FlexStation 3 マイクロプレートリーダーでデュアルルシフェラーゼ 発現を検出する >
SpectraMax Lを用いた96および384ウェルフォーマットのデュアルルシフェラーゼアッセイ。 >
SpectraMax Glo Steady-Luc Reporter Assay Kitを用いたルシフェラーゼ発現測定 >