吸光度 光学密度(OD)としても知られ、溶液に吸収される光の量
吸光度とは?
吸光度(A)は光学密度(OD)としても知られ、溶液に吸収される光の量です。透過度は溶液を透過する光の量です。吸光度と透過率は分光光度法でよく使われ、次の式で表されます:
吸光度方程式
A = Log10(I0/I)
ここで、I0は入射光の強度、Iは試料を通過した後の光の強度です。
T = I/I0 and %T = 100 (T)
透過度から吸光度を計算する式は次の通りです。
A = 2 - log10 (%T)
ランベルト・ベールの法則を用いて濃度を決定する。
試料の濃度は、ランベルト・ベールの法則を用いて吸光度から計算することができます:
A = ε * c * p
ここで、εはモル吸光率(モル吸光係数)であり、単位はL mol-1cm-1 です。
cは溶液中の溶質濃度、単位mol/L
pは試料の光路長で、単位はcm、例えばキュベットの場合は1cm。
Molecular Devicesが初めてUV対応のマイクロプレートリーダーを発表した時、マイクロプレートでの紫外線(UV)測定が可能になりました。それ以来、これによって可能になったDNA、RNA、タンパク質のマイクロプレート測定は非常に一般的になりました。吸光度がどのように測定されるのか、また吸光度を利用する主なアプリケーションの詳細については、こちらをご覧ください。
オンデマンド・ウェビナー
吸光度ベースのアッセイ・アプリケーションの探求:ウイルスから大麻研究まで
SpectraMax®マイクロプレートリーダーとSoftMax® Proソフトウェアによる吸光度測定は、マイクロプレートフォーマットまたはキュベットフォーマットのサンプルの光学濃度測定を可能にします。ソフトウェアの強力な分析ツールは、標準曲線と計算データを生成します。GLP/GMP準拠施設向けには、SoftMax Pro GxPコンプライアンスソフトウェアが搭載されています。
主なハイライト:
- 吸光度検出の仕組みは?
- ELISAで免疫グロブリン(Ig)を検出 - 感染症や免疫反応を調べる方法が増える
- 吸光度測定によるビールとワインの分析合理化
- ELISAを用いた大麻中の総アフラトキシンの測定
吸光度を支援する製品・サービス
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SpectraMax ABS / ABS Plus
マイクロプレートリーダーフィルター不要で幅広いアッセイを迅速に行える吸光プレートリーダー
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SpectraMax Plus 384
マイクロプレートリーダーSpectraMax® Plus 384マイクロプレートリーダーは、標準的な分光光度計と
マイクロプレートリーダーの両方のアプリケーションを同じインストゥルメンテーションで行うことができます。 -
SpectraMax QuickDrop
微量分光光度計微量吸光分光光度計でDNA、RNA、タンパク質をワンタッチ定量
吸光度の概要
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細胞生存能、細胞増殖、細胞毒性アッセイ
(MTT、XTT、MTS)MTT、XTT、MTSのようなテトラゾリウム塩を用いた比色分析法は、細胞増殖や細胞毒性を測定するのに用いることができます。例えば、MTTアッセイは、生細胞に存在する酵素によるMTTの還元に依存し、吸光度を測定することにより定量できる青色のホルマザン生成物を形成します。アッセイの選択は、希望するワークフローと所要時間に基づいて行うことができます。
比色分析による細胞生存率と増殖の評価 > -
カスタマーストーリー吸光プレートリーダーはDNA/RNA合成装置をテストします
オリゴメーカー社はDNA/RNA合成装置のテストにSpectraMax 190リーダーを使用しています。
「私たちはSpectraMax 190を、製造したDNA/RNA合成装置をテストする重要なステップとして使用しています。DNA/RNAシンセサイザーで合成されたDNA/RNAの量を決定するために、プライマーとプローブを定量する必要があります。」
- カール・ロス=ピーターセン
OligoMaker ApS デンマーク/コペンハーゲン > -
カスタマーストーリーバイオフィルム研究で使用される吸光プレートリーダー
カソリック・ドゥ・ルーバン大学は、バイオフィルム対策に当社のSpectraMax吸光度・マルチモードリーダーを使用しています。
UCLのWafi Siala氏は、「SpectraMax Mシリーズが提供する6~384ウェルまでのマイクロプレートサイズの豊富な選択肢も大きな利点です」と言っています。
ルーバン・カトリック大学 > -
DNA/RNA定量
分光光度計またはマイクロプレートリーダーで 260 nm で測定した DNA サンプルの吸光度を用いて濃度を算出することができます。DNAの吸光度定量は、マイクロプレートフォーマットで約0.25 µg/mLから約125 µg/mLの範囲のサンプルで機能します。
SpectraMaxマイクロプレートリーダーを使用したDNAおよびRNAの吸光度測定 >
SpectraMax ABS/ABS Plusマイクロプレートリーダーでの少量、ハイスループットのDNAおよびタンパク質検出 > -
ELISA / イムノアッセイ(抗原、抗体、サイトカインなどの定量化)
酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)は、通常マイクロプレートフォーマットで特異性タンパク質の量を測定するために使用され、結果は可視波長域の吸光度によって検出されることがほとんどです。
SpectraMax ABS PlusマイクロプレートリーダーでSimpleStep ELISAキットを用いてインターロイキン-8濃度を定量する >
Romer Labs AgraQuantメラミンアッセイとMolecular Devices吸光度リーダーを用いたハイスループットなメラミン検出 >
ASBC公認ELISA法を用いたビール中のグルテンの定量法 > -
エンドトキシンアッセイ
汚染物質のモニタリングは、製薬および医療機器産業における製造プロセス中の重要なステップである。頻度の高い汚染物質であるエンドトキシンは、発熱、炎症、頭痛、吐き気、そして死に至ることさえあります。幸いなことに、エンドトキシンは比濁、比色分析、あるいは蛍光分析を用いて容易にモニターすることができます。
SpectraMax ABS Plusマイクロプレートリーダーでエンドトキシンをモニタリング >
比色分析法を用いたGLP/GMP環境におけるマイクロプレートベースのエンドトキシン試験 >
PyroGeneリコンビナントC因子アッセイによるエンドトキシンの検出 > -
酵素カイネティクス、
細菌/微生物増殖多くの生物製剤実験では、細菌の増殖をモニタリングしたり、長時間(数時間、数日、数週間)にわたって酵素の変化を測定したりする必要があります。
ここでは、当社のインストゥルメンテーション装置とソフトウェアを使用して細菌の増殖を測定するカイネティックアッセイのセットアップ方法を説明する、いくつかのアプリケーションノートを紹介します:
細菌増殖アッセイの高度カイネティック解析 >
タンパク質発現と細胞増殖に対するIPTGの影響のマルチタスクカイネティック測定 >
不連続カイネティック測定を用いた長期細胞増殖測定 > -
吸光度検出の仕組みは?
分光光度計や吸光プレートリーダーは、試料に吸収された光の量を測定します。紫外線(UV)領域の光を検出できるマイクロプレートリーダーは、核酸(DNAとRNA)やタンパク質の濃度を、サンプルの標識なしで直接測定するのに使用できます。測定する物質によって異なるが、ある波長の光をサンプルに通し、マイクロプレートウェルの反対側にある検出器で、元の光がウェル内のサンプルにどれだけ吸収されたかを測定します。
SpectraMax ABS / ABS Plusマイクロプレートリーダー > -
迷光は光学濃度(OD)の測定値にどのような影響を与えますか?
迷光とは、インストゥルメンテーションの検出器に到達する不要な光の総称です。迷光が吸光度の測定に及ぼす影響は、多くの場合、予想外に低いOD、つまり測定された吸光度がサンプルの真の吸光度より低くなることです。この影響は通常直線性に影響し、ODが2.0~2.5を超える場合に最も大きくなります。迷光はユーザーによる補正は不可能であり、通常はユーザーエラーによるものではなく、劣化した励起フィルターなどの光学部品が原因として考えられます。分光光度計や吸光プレートリーダーには通常、迷光を最小限に抑える機能が組み込まれています。
PathCheck®テクノロジーにより、光路長1cmに自動補正された光学濃度測定値 > -
吸光度ELISAプロトコールを実行するには?
ELISA(酵素結合免疫吸着測定法)は、試料中の抗原を定量的に検出するために用いられる方法です。ほとんどの ELISA はマイクロプレートで行われ、マイクロプレートウェルの底が、目的の抗原が直接または抗体を介して付着する固体表面として機能します。抗原の検出には、基質と反応して着色溶液を生成する酵素結合体が使用されます。マイクロプレートウォッシャーでウェル内の非特異性未結合物質を洗浄し、吸光 ELISA プレートリーダーでターゲット抗原が存在するときに生じる色の変化を検出します。
ELISAを見る > -
微量アプリケーション
多くの種類のサンプルの定量は、キュベットやマイクロプレートでの吸光度測定によって達成される。しかし、材料が乏しい場合やサンプルが貴重な場合には、非常に少量のサンプルの定量が必要となります。2µL、あるいは0.5µLという微量サンプルの定量を可能にするインストゥルメンテーションやアクセサリーをご用意しています。
SpectraDrop™Micro-Volumeマイクロプレートを用いたタンパク質の直接定量 >
DNA定量用SpectraDrop™Micro-Volumeマイクロプレートの性能を最大限に引き出します。 >
QuickDrop分光光度計による核酸の定量法と分析 > -
PathCheck®テクノロジーによる光学密度測定
UV/VIS分光光度計とマイクロプレートリーダーは、ビーム形状が根本的に異なる。分光光度計では、サンプルは水平な1cmの光路を持つキュベットまたはチューブを通して読み取られるため、消光係数に基づくアッセイは簡単です。マイクロプレートリーダーでは、垂直の光束のため、光路長は各ウェルの液量に依存します。この問題はMolecular DevicesのPathCheck®テクノロジーによって改善され、光路長1cmに光学密度(OD)測定値を自動的に補正します。
PathCheck®テクノロジーにより光路長1cmに自動補正された光学密度測定値 >
SpectraMax Plus 384マイクロプレートリーダーを用いた赤ワイン中のフェノール化合物の測定 >
SpectraMaxマイクロプレートリーダーを使用したDNAおよびRNAの吸光度測定 > -
タンパク質の定量
(BCA、ブラッドフォード、
ローリーアッセイ)タンパク質濃度は、UV分光光度計で280nmの吸光度を用いて直接測定することも、BCAアッセイやブラッドフォードアッセイなどの比色分析法を用いて間接的に測定することもできます。
SpectraMax ABS Plusマイクロプレートリーダーで細胞溶解液中の総タンパク質を測定 >
EMax Plusマイクロプレートリーダーによるタンパク質定量 >
SpectraDrop™Micro-Volumeマイクロプレートを用いたタンパク質の直接定量 >
SpectraMax iD5リーダーでBCAベースのタンパク質定量を効率化 > -
吸光度は何で測定するのか?
吸光度は分光光度計またはマイクロプレートリーダーを用いて測定します。分光光度計は、試料に特定の波長の光を照射し、試料が吸収する光の量を測定するインストゥルメンテーションです。
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分光光度計 vs.プレートリーダー
標準的な分光光度計は、通常、水平に光を送るキュベットに入れたサンプルの吸光度を一度に測定します。吸光プレートリーダーはハイスループットで、通常96ウェルおよび384ウェルのマイクロプレート内のサンプルの吸光度を、各ウェルに垂直に光を送って測定できます。
吸光マイクロプレートリーダー >