ScanLaterウェスタンブロットアッセイキット
ScanLaterウェスタンブロットアッセイキットとは
ScanLater™ウエスタンブロット検出カートリッジに最適化されたこのアッセイキットは、マイクロプレートリーダーで初めてウエスタンブロット検出機能を実現しました。この基質フリーのアッセイを用いることで、研究者は従来の化学発光や蛍光ベースのアッセイと同等の感度を得ることができ、同時にウエスタンブロットとELISAアプリケーションを1台のリーダーに統合することができる。
ScanLater ウェスタンブロットアッセイキット
- ・時間分解蛍光検出
- ・ユーロピウム標識ヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス、ロバ抗ラット、ロバ抗ヤギまたはストレプトアビジン標識抗体
- ・ニトロセルロースおよびPVDF膜に対応
- ・340/80 nm励起、616/10 nm Emission範囲
- ・SpectraMax® i3、i3x、Paradigm®マルチモードリーダー用ScanLaterウェスタンブロット検出カートリッジとの使用に最適化されています。
- ・SpectraMax iD5®マルチモードマイクロプレートリーダー用改良TRF検出モジュールとの使用に最適化されています。
- ・時間に依存する基質添加ステップを排除
- ・ブロットシグナルの安定性を少なくとも1ヵ月間維持
- ・TRF法によるアッセイ感度の向上によりバックグラウンドノイズを低減
- ・従来のウエスタンブロット検出器と同様のフェムトグラムからピコグラムのタンパク質感度を維持
ScanLater™ ウェスタンブロットアッセイキットは時間分解蛍光（TRF）ベースのアッセイで、わずかフェムトグラムのタンパク質サンプルの定量に最適です。この新しいウェスタンブロット法を用いることで、研究者は以下のことが可能になります：
ScanLaterウェスタンブロットアッセイキットのデータ
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シグナル経時安定性
スキャンレーターアッセイシステムのシグナル安定性を示す結果が得られました。トランスフェリンの3希釈液を電気泳動で分離し、Immobilon FL膜に転写し、ウサギ抗トランスフェリンでプローブしました。ブロットをScanLater Eu標識抗ウサギ二次抗体とインキュベートした。メンブレンは1日目と30日目に測定した。結果は、トランスフェリン1xサンプル緩衝液の3倍連続希釈液を4-20%グラジエントゲルに30分間ローディングしたものである。タンパク質をImmobilon FL膜に移し、ウサギ抗トランスフェリンで4℃で一晩プローブした後、ユーロピウム標識抗ウサギIgGで1時間インキュベートした。ブロットを洗浄、乾燥し、SpectraMax Paradigmリーダーを用いて当日および1ヵ月後にスキャンした。 -
複数回のスキャンにおけるシグナルの安定性
結果は、同じメンブレンを7回連続測定した後のScanLater Eu標識二次抗体のシグナルの安定性を示しています。SpectraMax Paradigmリーダーで7回スキャンした後のユーロピウム標識抗ウサギIgGブロットの安定性を示す。 -
微量の内因性リン酸化型pChk1の検出
発癌物質MMSとUV照射処理によるHEK 293セルにおけるpChk1のリン酸化形態の検出（スタンフォード大学）。 -
微量の内因性リン酸化型JNK1の検出
刺激剤および阻害剤で処理したNHLF（天然ヒト肺線維芽細胞）細胞におけるJNK1のリン酸化形態の検出。 -
ScanLaterウェスタンブロット検出システムと化学発光ウェスタンブロット検出システムの比較
アルキル化剤である発がん物質MMSを異なる濃度（0、50、100ppm）で処理したHEK 293セルにおけるユビキチン化Rad-18の検出。ScanLaterウエスタンブロットシステムと化学発光ウエスタンブロットの比較（スタンフォード大学）。
ScanLaterウェスタンブロットアッセイキットの技術
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背景蛍光の発光寿命
バックグラウンド蛍光とEuキレート蛍光の発光寿命の模式図。信号は、自家蛍光を減らすために適切な時間遅延後に測定される。 -
ユーロピウムキレート励起および発光スペクトル
ユーロピウムキレート励起および発光スペクトルの模式図 -
ウェスタンブロットの原理
二次抗体をユーロピウムで直接標識したタンパク質検出法の模式図。 -
ScanLaterウェスタンブロットアッセイのワークフロー
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